如何制备琼脂糖凝胶？ 琼脂糖凝胶电泳制胶

网上有很多关于如何制备琼脂糖凝胶？的问题，也有很多人解答有关琼脂糖凝胶电泳制胶的知识，今天艾巴小编为大家整理了关于这方面的知识，让我们一起来看下吧!

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一、如何制备琼脂糖凝胶？

二、琼脂糖凝胶电泳正负极插反电泳一段时间后，之后调整正负极，重新加样，没有重新制胶，还能成功吗？

三、琼脂糖凝胶电泳原理 琼脂糖凝胶电泳原理简述

一、如何制备琼脂糖凝胶？

1、取20ml 5TBE缓冲液，加水至200ml，制成0.5TBE稀释缓冲液备用。2、胶液的配制：称取0.4g琼脂糖，置于200ml锥形瓶中，加入50ml 0.5TBE稀释缓冲液，放入微波炉(或电炉)中加热至琼脂糖完全熔化，取出摇匀，即为0.8%琼脂糖凝胶溶液。加热过程中不时摇动，使附着在瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时，应覆盖密封膜，以减少水分蒸发。

3、橡胶板准备：有机玻璃橡胶罐两端用橡皮膏(约1cm宽)密封严密。将密封好的橡胶槽放在水平支架上，插上样品梳，观察梳齿下边缘应与橡胶槽底部保持1mm左右的间隙。向冷却至50-60的琼脂糖凝胶中加入溴化乙锭(E溶液，使其终浓度为0.5g /ml)(凝胶中可不加入EB，电泳后用0.5g/ml EB溶液浸泡染色)。用移液管吸取少量融化的琼脂糖凝胶，密封橡胶。

在护肤霜内部，琼脂糖溶液凝固后，小心地将剩余的琼脂糖倒入胶罐中，使胶液形成均匀的胶层。倒胶时温度不能太低，否则固化不均匀，速度也不能太快，否则容易出现气泡。胶水完全固化后拔出梳子，注意不要损坏梳子底部的凝胶，然后向槽中加入0.5TBE稀释缓冲液，直到液面刚好过胶板上表面。因为边缘效应

样品槽附近会有一些凸起，防止缓冲液进入样品槽，所以要注意保证样品槽要装满缓冲液。4、加样：将10l酶解液与2l 6样品载体溶液混合，用微量移液管小心加入样品槽中。如果DNA含量较低，可以按照上述比例增加进样量，但总体积不得超过样品罐的容量。每次添加样品后，应更换吸头，以防止相互污染。装载样品时要小心，以免损坏凝胶或刺穿样品槽底部的凝胶。

5、电泳：加完样品后，关上电泳槽盖，立即打开电源。控制电压保持在60-80V，电流在40mA以上。当溴酚蓝带移动到离凝胶前沿约2厘米时，电泳停止。6、染色：电泳后将不含EB的胶板移入0.5g/ml EB溶液中，室温下染色20-25分钟。7、观察拍照：在波长为254nm的长波长紫外灯下观察染色或加EB的电泳胶片。

DNA的存在显示出肉眼可以分辨的橙红色荧光带。在紫光下观察时，戴上防护眼镜或有机玻璃面罩，以免损伤眼睛。相机镜头加入特写镜头和红色滤镜后，将相机固定在相框上，使用全色胶片，光圈5.6，曝光时间10-120秒(根据荧光条的深度而定)。8、 DNA分子量标准曲线的制备：在放大的电泳照片上，以样品槽为起点，用卡尺测量DNA。

EcoR和Hind限制性片段的迁移距离，单位为厘米。以核苷酸数目的常用对数为纵坐标，以迁移距离为横坐标，在坐标纸上画出一条连接所有点的光滑曲线，这就是该电泳条件下DNA分子量的标准曲线。9、 DNA片段大小的测定：在扩增的电泳照片上用卡尺测量DNA样品各片段的迁移距离，根据该值在DNA分子量标准曲线上找出对应的对数值，进一步计算出各片段的分子量(如果用单，

用对数绘图纸绘制标准曲线，根据迁移距离可直接查出DNA片段的大小)。另一方面，如果已知DNA片段的大小，也可以从标准曲线中找出其预期的迁移距离。10、 DNA限制性片段序列的确定：根据单限制性、双限制性和多限制性的电泳分析结果，根据DNA限制性片段大小的数据进行逻辑推理，进而确定每个限制性片段的序列和每个限制性位点的相对位置。呈环形

图形或线性图形，即形成DNA分子的限制性内切酶图谱。

二、琼脂糖凝胶电泳正负极插反电泳一段时间后，之后调整正负极，重新加样，没有重新制胶，还能成功吗？

这是不能接受的。如果发现的比较早，样品前沿没有跑出来(也就是还在胶上)，可以直接反转电极继续跑，对结果影响不大。用完了就只能再做胶水了。不建议添加更多样品

三、琼脂糖凝胶电泳原理 琼脂糖凝胶电泳原理简述

1、琼脂糖凝胶电泳原理：琼脂糖凝胶有一个复合体，物质的分子通过时遇到阻力，大分子涌动时遇到很大阻力。所以在凝胶电泳中，带电粒子的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，还取决于分子的大小，大大提高了分辨率。但由于其孔径与蛋白质相比过大，对大多数蛋白质而言，其分子筛效应可忽略不计，目前广泛应用于核酸研究。

琼脂糖凝胶电泳是一种以琼脂糖为支持介质的电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的主要区别在于，它具有“分子筛”和“电泳”的双重功能。2、核酸是两性电解质，等电点为pH2-2.5。在常规电泳缓冲液(pH约8.5)中，核酸分子带负电荷，在电场中移动到正极。核酸分子在琼脂糖凝胶中游动时，有电荷效应和分子筛效应，但以分子筛效应为主。

线性双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移率与DNA分子量的对数成反比。分子越大，阻力越大，在凝胶孔内移动越困难，所以迁移较慢。

以上就是关于如何制备琼脂糖凝胶？的知识，后面我们会继续为大家整理关于琼脂糖凝胶电泳制胶的知识，希望能够帮助到大家！