做琼脂糖凝胶电泳需要注意哪些问题（琼脂糖凝胶电泳常见问题）

网上有很多关于做琼脂糖凝胶电泳需要注意哪些问题的知识，也有很多人为大家解答关于琼脂糖凝胶电泳常见问题的问题，今天小编为大家整理了关于这方面的知识，让我们一起来看下吧!

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一、在做琼脂糖凝胶电泳时，如果胶的浓度不合适，会发生什么情况？

二、琼脂糖凝胶电泳图上样孔中的条带跑不出来怎么回事？

三、做琼脂糖凝胶电泳需要注意哪些问题

一、在做琼脂糖凝胶电泳时，如果胶的浓度不合适，会发生什么情况？

一般取决于电泳要分离的核酸的分子量：分子量大的核酸用浓度小的凝胶电泳，分子量小的核酸用浓度大的凝胶电泳。凝胶中核酸的浓度越大，电泳速度越慢。如果胶水浓度高，可能跑不动；如果胶水浓度低，可能会跑得太快，无法分离。可以找到核酸分子大小与琼脂糖浓度范围的对应关系。

二、琼脂糖凝胶电泳图上样孔中的条带跑不出来怎么回事？

样品点的不好或者孔做的不好，样品也没有提示DNA的凝胶浓度要根据目标带的长度来调整，一般是1.5%左右，不一定是这样的。紫外灯下没有带，也不一定没有洞，但少量是看不到的。可以测浓度看看，也可以直接跑PCR。

电泳时间可能过长，一般在75v30min左右，但要看离溴酚蓝的孔的距离和离目标带的孔的距离。胶体粒子的电特性可以通过电泳来确定。向阳极移动的胶体颗粒带负电，向阴极移动的胶体颗粒带正电。金属氢氧化物、金属氧化物等胶体粒子吸附阳离子，带正电荷；非金属氧化物和非金属硫化物等胶体颗粒吸附阴离子，带负电荷。

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在一定条件下，带电粒子在单位电场强度作用下单位时间内移动的距离(即迁移率)是恒定的，这就是带电粒子的物理化学特征常数。不同的带电粒子在同一电场中由于电荷不同或荷质比不同而电泳，经过一定时间后，由于移动距离不同而相互分离。

分离距离与施加的电场电压和电泳时间成比例。在外加DC电源的作用下，胶体颗粒在分散介质中定向向阴极或阳极运动，通过电泳分离物质。胶体有电泳现象，证明胶体的颗粒带电。各种胶粒性质不同，吸收的离子不同，所以带的电荷也不同。

三、做琼脂糖凝胶电泳需要注意哪些问题

凝胶电泳操作注意事项：1。缓冲系统：在没有离子的情况下，电导率最小，DNA不迁移，或者迁移极其缓慢。在离子强度高的缓冲液中，电导率高，产生热量，可能导致DNA变性，所以要注意缓冲液的使用是否正确。在长时间高压电泳过程中，建议经常更新缓冲液或在两个罐之间循环缓冲液。2.琼脂糖：不同厂家、不同批次的琼脂糖，杂质含量不同，影响DNA的迁移和荧光背景的强弱，应选择性使用。3.凝胶的制备：凝胶中加入的缓冲液应与电泳槽中的缓冲液一致，溶解的凝胶应及时倒入平板中，避免倾倒前凝固结块。倒入平板的凝胶要避免气泡，气泡会影响电泳结果。琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程凝胶电泳操作注意事项：1。缓冲系统：在没有离子的情况下，电导率最小，DNA不迁移，或者迁移极其缓慢。在离子强度高的缓冲液中，电导率高，产生热量，可能导致DNA变性，所以要注意缓冲液的使用是否正确。在长时间高压电泳过程中，建议经常更新缓冲液或在两个罐之间循环缓冲液。2.琼脂糖：不同厂家、不同批次的琼脂糖，杂质含量不同，影响DNA的迁移和荧光背景的强弱，应选择性使用。3.凝胶的制备：凝胶中加入的缓冲液应与电泳槽中的一致，溶解的凝胶应及时倒入平板中，避免倾倒.凝胶电泳操作注意事项：1。缓冲系统：在没有离子的情况下，电导率极小，DNA不迁移，或者迁移极其缓慢。在离子强度高的缓冲液中，电导率高，产生热量，可能导致DNA变性，所以要注意缓冲液的使用是否正确。在长时间高压电泳过程中，建议经常更新缓冲液或在两个罐之间循环缓冲液。2.琼脂糖：不同厂家、不同批次的琼脂糖，杂质含量不同，影响DNA的迁移和荧光背景的强弱，应选择性使用。3.凝胶的制备：凝胶中加入的缓冲液应与电泳槽中的缓冲液一致，溶解的凝胶应及时倒入平板中，避免倾倒前凝固结块。倒入平板的凝胶要避免气泡，气泡会影响电泳结果。琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程凝胶电泳操作注意事项：1。缓冲系统：在没有离子的情况下，电导率最小，DNA不迁移，或者迁移极其缓慢。在离子强度高的缓冲液中，电导率高，产生热量，可能导致DNA变性，所以要注意缓冲液的使用是否正确。在长时间高压电泳过程中，建议经常更新缓冲液或在两个罐之间循环缓冲液。2.琼脂糖：不同厂家、不同批次的琼脂糖，杂质含量不同，影响DNA的迁移和荧光背景的强弱，应选择性使用。3.凝胶的制备：凝胶中加入的缓冲液应与电泳槽中的缓冲液一致，溶解的凝胶应及时倒入平板中，避免倾倒前凝固结块。倒入平板的凝胶要避免气泡，气泡会影响电泳结果。4.样品用量：一般来说，一把宽度为0.5cm的梳子可以加入0.5ug的DNA，样品用量的多少取决于加样孔的大小和DNA中片段的数量和大小。剂量过大会使加样孔超负荷，导致拖尾和分散，特别是对于较大的DNA。5.电泳体系的改变会影响DNA的迁移，所以需要添加DNA标准参照来判断。6.DNA样品中盐的浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用相同的缓冲条件来消除这种影响。7.DNA的流动性取决于琼脂糖凝胶的浓度、迁移分子的形状和大小。区分宽r是可能的

以上就是关于做琼脂糖凝胶电泳需要注意哪些问题的知识，后面我们会继续为大家整理关于琼脂糖凝胶电泳常见问题的知识，希望能够帮助到大家！