刚果红染色法的方法 刚果红染色阴性
网上有很多关于刚果红染色法的方法的问题,也有很多人解答有关刚果红染色阴性的知识,今天艾巴小编为大家整理了关于这方面的知识,让我们一起来看下吧!
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一、什么是革兰氏染色法?染色过程应注意什么
革兰氏染色是细菌学中广泛使用的一种差异染色方法。它于1884年由丹麦医生和细菌学家汉斯克里斯蒂安乔奇姆格拉姆(1853-1938)创立。革兰氏染色法一般包括四个步骤:一次染色、媒染、长期分析、植权、脱色和二次染色。应注意以下事项
1.选择生长活跃的菌株进行染色,老年期的革兰氏阳性菌会被染成红色,造成假阴性。2.涂片不能太厚,以免脱色不完全造成假阳性。3.脱色是革兰氏染色成功的关键。脱色不足导致假阳性,脱色过度导致假阴性。方法原理:
生物染色中使用的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料。碱性染料的离子带正电,能与带负分布无年龄电荷的物质结合。由于细菌蛋白质等具有较低的电点,当它们在中性、碱性或弱酸性溶液中生长时,往往带负电。因此,通常用碱性染料(如亚甲蓝、结晶紫、碱性品红或孔状红)着色。
酸性染料的离子带负电,能与带正电的物质结合。当细菌分解糖产生酸时,培养基的pH值降低,细菌的正电荷增加,因此容易被酸性染料如曙红、酸性品红或刚果红染色。中性染料是前两者的结合,如弘毅洁当品柳石塔鲁美兰、弘毅天青等。
二、刚果红染色法的方法
刚果红染色有两种常用方法。首先培养微生物,然后加入刚果红进行显色反应。用1毫克/毫升覆盖有菌落的培养基。10 ~ 15分钟后,倒出CR溶液,加入摩尔浓度为1 mol/L的NaCl溶液,15分钟后倒出NaCl溶液。此时,在产纤维素酶的菌落周围会出现一个透明圈。
(添加NaCl的原因:刚果红是结合在培养基上的多糖底物,但分解纤维素的细菌能产生纤维素酶,能把这种多糖底物分解成低聚糖,所以刚果红不能被结合,氯化钠能洗去结合不牢固的刚果红,从而留下大小不一的透明圈,大的透明圈分解纤维素的能力强。)方法二:倒平板时加入刚果红配成质量浓度为10 mg/mI的CR溶液,灭菌。向培养基中加入1毫升。
铬溶液的比例,混合均匀,倒入盘中。当细菌在培养基上向后生长时,产生纤维素酶的菌落周围会出现明显的透明圈。两种刚果红染色方法的比较:刚果红用于筛选纤维素分解菌已有20多年的历史,教材中给出了两种方法。第一种方法是传统方法,优点是这样表现出来的显色反应基本上是纤维素分解菌的作用。
缺点二:有些微生物具有降解色素的能力。它们会降解刚果红,在长期培养过程中形成明显的透明圈,与纤维素分解菌不易区分。
以上就是关于刚果红染色法的方法的知识,后面我们会继续为大家整理关于刚果红染色阴性的知识,希望能够帮助到大家!
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