液相色谱法的原理是什么？ 液相色谱仪原理简述

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一、液相色谱法的原理是什么？

二、[简答题]简述高效液相色谱法测定固定污染源中有组织排放苯并［a］芘的方法原理。

三、HPLC原理及基本操作是什么？

一、液相色谱法的原理是什么？

液相色谱系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等部分组成。储液器中的流动相由高压泵泵入系统，样品溶液通过进样器进入流动相，由流动相载入色谱柱，由于样品溶液中的各组分具有两相分配系数不同，当两相作相对运动时，经过反复的吸附-脱附分配过程，各组分运动速度相差较大，分离成单个组分依次流出塔外，通过探测器。当样品的浓度被转换成电信号并传送到记录仪时，数据以图表的形式打印出来。液相色谱仪主要包括进样系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。

二、[简答题]简述高效液相色谱法测定固定污染源中有组织排放苯并［a］芘的方法原理。

用不粘附的玻璃纤维滤芯或玻璃纤维滤膜采集样品，用环己烷提取苯并[a]芘，苯并[a]芘用环己烷通过弗罗里硅层析柱。洗脱氯甲烷和丙酮的混合溶剂，浓缩后，在装有荧光检测器的高效液相色谱仪上测定。

三、HPLC原理及基本操作是什么？

原则HPLC 仪器根据各种相互作用分离混合物。这种相互作用力通常是分析物和分析柱之间的非共价性质。使用高效液相色谱时，待测液体分时注入色谱柱，通过压力在固定相中移动。由于分析物中不同物质与固定相的不同相互作用，不同物质依次离开色谱柱。通过检测器得到不同的峰信号，每个峰代表一种不同类型的化合物，最后通过分析比较这些信号来判断分析物中含有的物质。以液体为流动相设计的色谱分析仪器称为液相色谱仪。配备高压输液泵、高效固定相、高压灵敏检测器等装置的液相色谱仪成为高效液相色谱仪。高效液相色谱的种类很多，但不管是哪种高效液相色谱，基本上都分为高压输液装置、进样系统、分离系统和检测系统四个部分。操作待分离和分析的样品混合物以不连续的小体积（通常为微升）引入渗透通过色谱柱的流动相流中。作为与吸附剂（也称为固定相）特定物理相互作用的函数，样品的组分以不同的速度移动通过色谱柱。每种组分的速度取决于其化学性质、固定相（色谱柱）的性质以及流动相的组成。特定分析物洗脱（从色谱柱中出现）的时间称为其保留时间。在特定条件下测量的保留时间是给定分析物的识别特征。有许多不同类型的色谱柱可用，填充有不同粒径、孔隙率和表面化学性质的吸附剂。使用更小粒径的包装材料需要使用更高的操作压力（“背压”）和通常改进的色谱分辨率（从柱中出现的连续分析物峰之间的分离）。吸收性颗粒在性质上可以是疏水的或极性的。常用的流动相包括水与各种有机溶剂（最常见的是乙腈和甲醇）的任何混溶组合。一些HPLC 技术使用无水流动相（参见下面的正相色谱）。流动相的水性成分可能含有酸（例如甲酸、磷酸或三氟乙酸）或盐，以帮助分离样品成分。在层析过程中，流动相的组成可以保持不变（“等度洗脱模式”）或变化（“梯度洗脱模式”）。等度洗脱通常非常有效地分离与固定相具有非常不同亲和力的样品组分。在梯度洗脱中，流动相的组成通常从低洗脱强度到高洗脱强度不等。流动相的洗脱强度通过分析物的保留时间反映，高洗脱强度导致快速洗脱（=较短的保留时间）。反相色谱中的典型梯度曲线可能从5% 乙腈（在水或水性缓冲液中）开始，并在525 分钟内线性增加至95% 乙腈。恒定流动相组成的周期可以是任何梯度曲线的一部分。例如，流动相的组成可在5% 乙腈中保持1-3 分钟，然后线性变化至95% 乙腈。流动相组成的选择取决于各种样品成分（“分析物”）与固定相之间相互作用的强度（例如，反相HPLC 中的疏水相互作用）。在色谱柱分离过程中，分析物根据它们对固定相和流动相的亲和力在固定相和流动相之间分配。该分配过程类似于液-液萃取过程中发生的过程，但该过程是连续的而不是逐步的。在此示例中，使用水/乙腈梯度，一旦流动相在乙腈中的浓度更高（即，在具有更高洗脱强度的流动相中），更多的疏水性组分将稍后被洗掉。剥离（从柱中洗脱）。流动相组分、添加剂（如盐或酸）和梯度条件的选择取决于色谱柱和样品组分的性质。通常对样品进行一系列实验，以找到能够充分分离它们的HPLC 方法。使用高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛应用于化学和生化分析，常用于制药、化学、环保、生命科学、食品工业等方面的研究。高效液相色谱与经典液相色谱在原理上没有本质区别。其特点是采用高压输液泵、高灵敏度检测器和高效颗粒固定相，可进行分离、定性和定量分析。适用于分析高沸点、低挥发性、大分子量和不同极性的有机化合物。例如：可检测分析食品中三聚氰胺的含量。

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