过氧化氢酶体的发现历程？ 过氧化氢酶的测定

网上有很多关于过氧化氢酶体的发现历程？的问题，也有很多人解答有关过氧化氢酶的测定的知识，今天艾巴小编为大家整理了关于这方面的知识，让我们一起来看下吧!

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一、过氧化氢酶体的发现历程？

二、过氧化氢酶活性的测定 高锰酸钾滴定法

三、过氧化氢酶km值的测定

四、过氧化氢酶的测定

一、过氧化氢酶体的发现历程？

作为一种物质，过氧化氢酶是由过氧化氢(H2O2)的发现者Thenard于1811年首次发现的。1900年，奥斯卡勒夫(Oscar Loew)将这种能降解过氧化氢的酶命名为“过氧化氢酶”，并发现这种酶存在于许多植物和动物中。

牛肝中的过氧化氢酶于1937年在詹姆斯B萨姆纳结晶，并于次年获得其分子量。1969年，解决了牛过氧化氢酶的氨基酸序列。然后在1981年，分析了它的三维结构。

二、过氧化氢酶活性的测定 高锰酸钾滴定法

过氧化氢酶活性的测定是基于过氧化氢酶(PHD)能催化过氧化氢产生氧气的特性。常用的有碘量法和电极法。

前者通过测量PHD催化H2O2反应后，H2O2与碘化物反应生成的碘的变化来计算PHD的活性。该方法设备简单，但操作复杂，误差较大。后者的原理是H2O2是一种电活性物质，但其产物经过PHD催化后是一种电活性物质。用铂电极测量PHD催化前后电流变化引起的电压变化，测量PHD的活性。分光光度法、Valsalva呼吸计测压法、硫酸高铈法等也可应用。紫外-可见分光光度法是测定物质在190 ~ 800 nm波长范围内吸光度的方法，用于鉴别、杂质检查和定量测定。当光穿过被测物质溶液时，物质的吸收程度随光的波长而变化。因此，通过测量物质在不同波长下的吸光度，绘制吸光度与波长的关系，就可以得到被测物质的吸收光谱。

三、过氧化氢酶km值的测定

一、Km值的定义：

(1)当酶促反应速度等于最大反应速度的一半时，底物浓度为Km值。(2) Km值是酶促反应的特征常数。

二、实验原理

(一)双倒数作图法(林作图法)

以1/[S]为横坐标，1/V为纵坐标，求Km值。(B)汉斯制图法

以[S]/V为横坐标，以[S]为纵坐标，求Km值。(3)过氧化氢酶Km值的测定原理

1、HOz被过氧化氢酶分解生成HO和O2；

2Hzo过氧化氢，2H O O21

2、[S]=HO的添加量；

3、V=固定时间内反应的HzO2量=加入的HzO2量-剩余的HzO2量；4、剩余HOz的量可以通过KMnO4滴定来确定：

四、过氧化氢酶的测定

你好！

使用过氧化氢酶检测试剂盒是一种相对简单的方法：

过氧化氢酶检测试剂盒是一种通过显色反应检测细胞、组织或其他样品中过氧化氢酶的简单易行的方法。

(过氧化氢酶)活性试剂盒。当过氧化氢相对丰富时，过氧化氢酶可以催化过氧化氢生成水和氧气。残留过氧化物

在过氧化物酶的催化下，氢可以氧化生色底物生成红色产物(n-(4-安替比林基)-3-氯-5-磺酸酯-对-

苯醌单亚胺)，最大吸收波长为520nm。使用过氧化氢标准，制作标准曲线，以便可以计算出样品中的过氧化氢。

单位时间、单位体积内有多少过氧化氢被酶转化为水和氧，从而计算出样品中过氧化氢酶的活性。

过氧化氢酶分布广泛。在肝脏、肾脏和红细胞中，过氧化氢酶的水平非常高，这些器官和细胞用于清除可能导致氧化损伤的过氧化物。

氢的主要场所。

过氧化氢酶的活性也可以用紫外分光光度计测定，但蛋白质或其他成分在A240附近有较强的吸收，会对测定造成严重的干燥。

打扰。因此，紫外法测定过氧化氢酶活性更为合适。通过检测A520，用试剂盒测定过氧化物酶催化的过氧化物酶。

过氧化氢氧化显色底物产生的红色产物干扰因素少，检测灵敏度高，可检测低至1U/毫升的过氧化氢酶。

该试剂盒可以检测生物样品如全血、红细胞裂解物、血清、组织匀浆产物和细胞裂解物中过氧化氢酶的活性。一套工具

总共可以进行100次测试。

如何使用：

准备250mM过氧化氢溶液。该试剂盒提供的过氧化氢浓度约为1M。因为过氧化氢不是很稳定，使用前需要自己测定。

实际浓度。用本试剂盒提供的过氧化氢酶检测缓冲液将浓度约为1M的过氧化氢稀释100倍，使过氧化氢浓度约为10mM。决定

过氧化氢(毫米)=22.94XA240

以便计算由试剂盒提供的过氧化氢的实际浓度。然后根据实际过氧化氢浓度配制250mM过氧化氢溶液。

B.准备5mM过氧化氢溶液。根据测量的实际过氧化氢浓度，制备5mM的过氧化氢溶液。

c、配制显色工作液。将显色底物在冰浴中溶解，妥善包装后使用，避免反复冻融。其他试剂放在冰浴上备用。取适量过量

将氧化酶与显色底物按1:1000的比例稀释，制成显色工作液。比如取5微升过氧化氢酶，加入5ml显色底物，混匀即可。

5ml显色工作液。

2.样品的制备：

用合适的裂解物裂解细胞或组织(可使用碧云天生产的Western和IP细胞裂解物进行裂解)。试剂盒提供的过氧化氢酶用于检测。

用缓冲液稀释样品，并向裂解样品中加入至少相同体积的过氧化氢酶检测缓冲液进行稀释。具体稀释倍数可参考表1。

以上就是关于过氧化氢酶体的发现历程？的知识，后面我们会继续为大家整理关于过氧化氢酶的测定的知识，希望能够帮助到大家！