he染色法步骤,HE染色操作步骤
对于he染色法步骤,HE染色操作步骤,很多网友还不是很明白,今天艾巴小编收集了这方面的知识,就将其分享出来。
适用范围:
1.组织学、胚胎学、病理学教学与研究。
he染色实验具体步骤:
1.取材与固定:固定液——甲醛(福尔马林)取自新鲜的人或动物尸体(一般厚度小于0.5 cm)放入预先配制好的固定液(10%福尔马林、布恩氏固定液等。)使蛋白质中的组织和细胞变性、凝固,防止细胞自溶或死亡后自溶。
2.修剪、脱水、透明:脱水器3354酒精透明剂3354二甲苯对不同组织的固定时间不同。固定成功后,需要修剪25px*25px*5px,放入包埋盒中,用流水冲洗(去除组织中的固定剂)30分钟。对于不同浓度的酒精脱水,一般采用低浓度到高浓度的酒精作为脱水剂,逐渐去除组织块中的水分。
然后将组织块放入二甲苯中,二甲苯是一种可溶于酒精和石蜡的透明剂,组织块中的酒精被二甲苯取代,这样就可以包埋在蜡中。
3.浸蜡、包埋:石蜡将透明组织块置于融化的石蜡中,置于溶蜡盒中保温。石蜡完全浸入组织块后,包埋,冷却,凝固成块。包埋的组织块在切片器上被切成薄片之前会变硬。
4.切片、铺片、烘烤:将包埋好的蜡块固定在切片机上,切成薄片,一般5-8微米厚。切好的薄片往往会起皱,所以要用热水烫一下,然后贴在载玻片上,放在45的恒温箱里烘干。
5.脱蜡、除水、染色:脱蜡剂:二甲苯至水溶液:酒精染色剂:苏木精水溶液、酒精曙红染料
色液:
。
1.染色前,切片中的石蜡必须用二甲苯去除,然后用高浓度到低浓度的酒精染色,最后用蒸馏水染色。苏木精(H)是一种碱性染料,能把细胞核和细胞内的核糖体染成蓝紫色,碱性染料染出的结构是嗜碱性的。曙红(E)是一种酸性染料,可将细胞质染成红色或微红色,酸性染料染色的结构呈嗜酸性。0102030405
HE染色过程::
1.将已放入蒸馏水中的切片放入苏木精水溶液中染色几分钟。
2.在酸性水和氨水中分别进行几秒钟的颜色分离。
3.用流动水冲洗1小时,然后加入蒸馏水一会儿。在
4.在70%和90%的酒精中脱水10分钟。
5.用酒精曙红染料溶液染色2-3分钟。用纯酒精将染色切片脱水,然后用二甲苯使其透明。01
脱水、透明:同2步骤:
1.将透明切片滴上口香糖,盖上盖玻片,密封。当牙龈稍干时,在上面贴上纸条,将标本切片备用。生理盐水,蒸馏水,PBS实验必备溶剂,里面很多试剂不用亲自去买,应该有专门做切片染色的实验室,这些都是公用的!
以上知识分享到此为止,希望能够帮助到大家!
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